德牧狼爪怎么？
德国牧羊犬原产于德国，是世界著名的牧羊犬品种。因其具有忠心耿耿、服从命令、警觉性高、资质优异、身体强健、忠诚度高、记忆力好、追踪快速、吠声凄厉优美等特点而闻名。
1899年，由德国牧羊犬育种协会宣布正式登陆，以德国的牧羊犬身为基础，结合各国优秀的牧羊犬品种改良而建立的。并先后得到了大量的荣誉，如：“世界上最受欢迎的犬种”、“世界犬类竞技第一名”、“世界犬类英雄第一”、“世界看门犬第一”等，堪称世界NO.1牧羊犬。
现在的德牧狼爪怎么还有的呢？德国牧羊犬在1936年被训为军犬，参加搜捕恐怖分子，有狼的作风，抓兔子等小动物没什么问题，但耐久力和体力不够，遂淘汰；自1937年3月起，由普鲁士牧羊犬改良会为测试而造之新牧羊犬种，即今著名之德国狼犬，或称德国哈巴犬。
从战争开始，一直到1945年二战结束，都是德国军犬的主力，用于搜寻战地逃兵和搜寻炸毁的桥梁、铁路和矿井，都是让狼狗来完成的。因为狼狗的嗅觉非常灵敏，可以寻找3000米之外的一枚螺钉。 战后德国狼犬流入民间，做为家庭犬来饲养。1975年德国狼犬引入中国，早期又称哈巴犬。
（1）德牧狼爪（左前爪）与狼有关的DNA片段，长约2192-2225bp。狼基因片段的提取采用酚-硫酸法提取犬的总DNA。PCR扩增以0.5L母液为模板进行30个循环的扩增，循环参数为：94℃30s，57℃30s，72℃30s；72℃延伸10min。
（2）德牧狼爪（右前爪）与灰狼相关的DNA片段，762bp。为了便于在遗传图上定位该基因座，在引物5'端添加了5个碱基的带有一段同源盒结构（HO）的探针p9，其产物为306bp。PCR扩增体系为：50L去离子水，45LPCR反应液，其中包括1L10×PCR缓冲液（内含4.75L蒸馏水），50mgLXBdNTP，300mgLEBd引物，100LPCR反应液含200-300pg基因组DNA。PCR反应在基因公司的MAXIII?循环仪上进行。第一阶段：95℃，3min；第二阶段：25个循环，每个循环包括94℃30s，68℃30s，72℃45s；最后65℃延伸10min。
PCR产物在含甘油40%，8%CHOK，1%溴酚蓝的1%TAE缓冲液中经1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，以KOD基因组DNA为标记，UVP凝胶成像系统拍照。
（3）确定DNA型式：从琼脂糖凝胶上切下PCR产物带，进行测序，方法为双序列测序，通过NCBI的BLAST核酸序列数据库（URL），将所得的密码子与从基因库中已知的序列进行对比，然后确定该基因座的型式。
该实验选择具有代表性的雌性牧羊犬（GSD）和雄性牧羊犬（WES），基因型分别为：1/1，并取它们的B刺（狼牙）和O刺（普通牙齿），进行扫描电镜观察；观察用EIS4500超高清扫描电子显微镜，放大倍数分别为500倍和2000倍。